CIK细胞过继免疫治疗

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine - induced killer，CIK) 是1991年由Schmidt-Wolf 等在CD3激活的杀伤细胞(anti-CD3 monoclonal antibody activated killer，CD3AK)基础上制备的一类新的杀瘤细胞,是人外周血单个核细胞(PBMC)在体外经多种细胞因子(IFN-γ、rIL-2、CD3McAb和IL-1α等)刺激后获得的一群异质细胞,兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤特点。目前CIK细胞疗法已用于肾癌、恶性黑色素瘤、结肠癌、淋巴瘤等多种肿瘤的临床研究,并取得了一定的治疗效果。

研究表明，与淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine activated killer cells，LAK)、肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltration lymphocyte，TIL）和CD3AK细胞相比，CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感、对正常骨髓造血前体细胞细胞毒性小、能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡、疾病的严重性和转移不影响CIK细胞抗瘤活性等优势，因此，CIK细胞在肿瘤过继免疫治疗中具有良好的应用前景。

1、CIK细胞的诱导和生物学特性

CIK细胞中的效应细胞在正常外周血中极其罕见，仅1％～5％。目前体外诱导CIK细胞的方法有多种，主要区别在于细胞因子的组合不同。CD3McAb和IFN-γ是必要的组分，CD3 McAb起到丝裂原活性的作用，可以与T细胞表面的CD3交联，诱导细胞活化，而IFN-γ可以诱导IL-1等细胞因子的合成。在CIK细胞培养过程中，因子加入的顺序对它的毒性也有一定的影响，IFN-γ只有在IL-2加入24 h前加入才能提高CIK细胞毒活性（若与IL-2同时或晚于其加入则失去对细胞毒性的提升作用），此效应与细胞表面IL-2受体上调有关。除此之外的细胞因子选择上，常用于CIK细胞培养的细胞因子有：IL-2、外源性凝集素（phytohemagglutinin，PHA）、IL-7、IL-12等。

CIK细胞是一异质性细胞群体，多数细胞带有T细胞标志(TCRα/β 86.5％±5.7％、TCRγ/δ4.5％±2.6％、CD4 45.4％±3.2％、CD8 47.7％±11.0％)，部分带有NK细胞标志(CD16 10.4％±4.9％、CD56 28.5％±8.6％)，其中有88％的CD56+细胞共表达CD3，而这部分CD3+CD56+细胞被证明是CIK细胞群体中的主要效应细胞。CD3+CD56+细胞在未经培养的PBMC中约占1％-5％，培养后在绝对和相对数量上都可获得明显增长(扩增30d，细胞数量扩大100倍，群体中比例扩大10倍), CD3+CD56+细胞主要来源于PBMC中的T细胞(CD3+CD56-)，而非NK细胞(CD3-CD56+)，进一步研究发现，在培养过程中，T细胞中的CD4+CD8-细胞亚群不出现CD56表达，而CD4-CD8+亚群有1/4，CD4+CD8+亚群有1/3，CD4-CD8-亚群有一半以上出现CD56的表达，由于PBMC中CD4+CD8+与CD4-CD8-两亚群比例很小，因此CD4-CD8+ T细胞亚群是CIK效应细胞的主要来源。不过,在扩增后的CD3+CD56+细胞中，表达CD8与否对于其细胞毒性效应并无影响。

2、CIK细胞的作用机制

现今关于CIK杀伤靶细胞的原理尚未完全阐明，可能的机制有：

①对肿瘤细胞的直接杀伤。 Mehta等认为CIK对靶细胞的杀伤有两条途径：其一，CIK细胞被淋巴细胞功能相关抗原-1 (lymphocyte function associated antigen-1，LFA-1) 有关识别结构激活，导致胞浆毒性颗粒依赖性的溶细胞作用，这条途径与胞浆内环磷酸腺苷(cAMP) 浓度无关；其二，CIK细胞表面的CD3样受体被结合，而激活CIK细胞产生胞浆毒性颗粒介导的溶细胞作用，这条途径与胞浆内cAMP水平有关。

②活化后产生的大量炎性细胞因子的抑瘤杀瘤作用。大量实验证明,培养的CIK细胞可以分泌多种细胞因子，如TNF-α、IL-2、GM-CSF、IFN-γ等，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用,还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。

③诱导肿瘤细胞凋亡。 Verneris 等的实验提示,CIK细胞在培养过程中表达FasL，能抵抗FasL + 肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL 凋亡,又可诱导Fas + 肿瘤细胞凋亡，发挥对肿瘤细胞慢性杀伤作用，保证抗瘤活性的长期持久。Sun等在研究CIK杀伤胃癌细胞MGC-803时发现，CIK细胞通过下调p53、C-myc和Bcl-2 的表达及上调Bax的表达在早期诱导肿瘤细胞调亡，晚期诱导肿瘤细胞坏死。

④促进T细胞增殖活化。任欢等研究认为，CIK细胞体内抗瘤作用可能与促进宿主体内T细胞增殖活化有关。并推测，原始的CD3+ CD56+ T细胞随CIK输注体内后，在宿主机体状态或肿瘤抗原刺激下转变成具有杀瘤活性的细胞毒性T细胞(cytotoxic T-lymphocyte，CTL)，发挥抗瘤作用。