鼓膜上皮干细胞的分布和培养

确定上皮干细胞在鼓膜上的分布，鼓膜穿孔后干细胞的变化，鼓膜上皮不同部位的体外培养生长特点，建立鼓膜干细胞体外培养和增殖的方法。

4只幼年SD大鼠和4只成年SD大鼠作正常鼓膜观察，28只成年大鼠作鼓膜紧张部中央2mm穿孔。于穿孔后不同时间取鼓膜冰冻切片，进行β1整合素和角蛋白19免疫组化检测。30个成年SD大鼠鼓膜，用丝裂霉素C损伤粘膜面，分成鼓环上皮和紧张部中央上皮两部分，比较鼓环和紧张部两处细胞的细胞倍增时间。以1小时为标准，把鼓环细胞按贴壁时间分类。

角蛋白19 和β1整合素阳性细胞在紧张部分布于鼓环和锤骨柄区域，在松弛部散在分布，在紧张部中央无阳性细胞。幼年鼠和成年鼠无差别。紧张部急性穿孔后鼓环和锤骨柄阳性细胞数量增加，穿孔边缘无阳性染色。体外培养鼓环上皮细胞倍增时间明显短于紧张部中央上皮。1小时内贴壁的细胞，生长活跃，产生较大的集落，富含上皮干细胞。

上皮干细胞在鼓膜紧张部分布于鼓环和锤骨柄区域，在紧张部的中央没有干细胞。在适当的培养液中，干细胞增殖良好，并可以通过贴壁时间进行初步的纯化。