肩井穴位于肩上，在大椎穴与肩峰端连线的中点上。取穴通常取坐位、低头，确定后正中线，即在背部中央所做的垂直线，在后正中线上可见颈背部的交界处的椎骨上有一高突，该高突能够随着颈部左右摆动而转动，即第七颈椎的棘突。该棘突下有一个凹陷，即大椎穴。在大椎穴与肩部最高点连线的中点，前对乳头就是肩井穴。
其是手少阳、足少阳、足阳明与阳维脉的交会穴，主治的病证有：
1、肩背部的痹痛、上肢不遂、颈项强痛等肩颈上肢部的病证；
2、乳痈、乳汁不下、难产、胞衣不下等，临床中经常用于治疗颈项部、颈肩部软组织的疾患、乳腺炎等，配合肩髃、天宗等治疗颈项部的疾病，配伍乳根、少泽，可以主治乳汁不下、乳痈疾病，在马氏温灸法中配灸足三里，能使腹中逆气下行，使大便通畅。
