甲氨蝶呤具有广谱抗肿瘤活性，可以单独应用，或者与其他的化疗药物联合使用。一般它的适应症还是比较广泛的。第一、它可以用于抗肿瘤治疗单独使用，比如乳腺癌、绒毛膜癌、恶性葡萄胎或葡萄胎。第二、它也可以联合应用抗肿瘤治疗，比如急性白血病、伯基特淋巴瘤、晚期淋巴肉瘤等等。第三、大剂量治疗，或者与其他的化疗药物联合应用治疗成骨肉瘤、急性白血病、支气管肺癌，或者头颈部上皮癌等等。大剂量甲氨蝶呤应用的时候，必须应用甲酰四氢叶酸进行解救。
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