青霉素皮试配制方法是用生理盐水作为溶剂，将青霉素溶于生理盐水中，浓度为500U/mL，要求采用无菌操作法配制。制成后的溶液装入灭菌的小瓶中，封口备用。室温条件下只限24小时内使用，过期则废弃不用。
使用时将配制好的试验液注入病人的一侧肘内侧皮内，同时用另一侧上肢做阴性对照，等待20分钟。如果出现中心晕团，周围红斑直径超过1cm，通常考虑阳性。如果病人没有晕团，也没有红斑，要询问病人是否有胸闷、喘憋、皮肤发痒、肢体麻木等不适症状，这些症状也提示病人是青霉素过敏。
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