补益法治疗肿瘤效果好吗

补益法是治疗肿瘤常用的治法。在临床上，用这种治法治疗肿瘤究竟是利是弊尚有争论。大部分学者认为，补气药能抑制肿瘤的生长，延长患者的生存期，提高患者的生活质量[1]；而有些临床医生则认为补益药会促进肿瘤的生长，临床上不宜多用。为了探讨补益药对肿瘤的作用，我们选择了补益代表方剂四君子汤，观察它对荷瘤小鼠抑瘤率及诱导肿瘤细胞凋亡作用。

1、 材料和方法

1.1 实验动物 昆明种小鼠60只，体重20g±2g，雌雄各半，购自第一军医大学实验动物中心。分笼饲养，自由摄食、饮水，鼠房保持通风。

1.2 细胞株 细胞株为小鼠SRS-82腹水瘤株，皮下接种可生成肉瘤。由本校药物研究所提供，常规复苏传代培养。

1.3 药物制备 本实验所用药物购自南方医院药房，5-FU注射剂由江苏南通制药总厂制造（苏卫药准字第241201号）。四君子汤组成：人参9g，白术9g，茯苓9g，炙甘草6g。制备方法：常规水煎煮2次，所得水煎液经70℃恒温水浴蒸发浓缩，最后得到四君子汤药液浓度为（含生药）0.33g/ml，4℃冰箱保存。无菌生理盐水将5-FU注射液稀释为3mg/ml，4℃冰箱保存。

1.4 荷瘤小鼠模型的建立 体外复苏培养SRS-82细胞，在细胞的指数生长期收集细胞，1000r/min离心，PBS洗涤2次，离心去上清，用无菌生理盐水稀释，调整到2～3×106/ml。随机选取10只健康昆明小鼠，每只用上述细胞悬液0.4ml腹腔注射，注意观察接种小鼠的腹水生长情况，约一周后接种小鼠腹部明显胀大、凸出，抽取腹水，腹水呈乳白色，在无菌试管中用无菌生理盐水以1：2稀释，最后获得约15ml腹水稀释液。用上述腹水稀释液对36只昆明小鼠进行接种，每只用0.2ml稀释液接种于右后肢皮下。

1.5 实验分组和给药 36只造模成功的小鼠随机分为3组，每组12只，组内编号。3组分别为：空白对照组，四君子汤组，5-FU组。所有处理自造模后第二天开始，四君子汤组用制备的四君子汤煎剂灌胃，每只0.5ml，每日1次；空白对照组每日用等量的生理盐水灌胃；5-FU组用稀释的5-FU注射剂腹腔注射，每只0.2ml，隔日1次。以上处理连续进行15天后，杀死小鼠，剥离瘤块。

1.6 称瘤重并计算抑瘤率 剥离瘤块，电子天平称重，并根据常规公式计算抑瘤率。

1.7 透射电镜观察肿瘤细胞形态结构 每组随机取2只小鼠做电镜观察。剥离瘤体后切取0.5mm3体积的瘤体组织，迅速用戊二醛固定。经过脱水、渗透、包埋、切片、染色等等步骤，将做好的电镜切片在透射电镜下观察。

1.8琼脂糖凝胶电泳 配制好试剂后，提取DNA并进行电泳。1％琼脂糖电泳，电压60V，电泳时间1.5h。

1.9统计学处理 全部数据用SPSS10.0进行处理，采用随机设计的方差分析。

2、 结果

2.1瘤重和抑瘤率 各组瘤块重量及抑瘤率见表1。由表可见，各给药组与空白对照组相比瘤重明显减轻，其中以5-FU组抑瘤效果最明显，瘤重最轻（P0.01）；四君子汤亦有明显抑瘤作用（P0.05）。

表1 各组平均瘤重及抑瘤率

实验分组

瘤重（g）（х±s）

抑瘤率（％）

空白对照组

4.78±1.53

四君子汤组

4.03±1.23*

15.69

5-FU组

3.12±1.08**

34.1

*与空白组比较P0.05，**与空白组比较P0.01

2.2透射电镜观察结果 四君子汤组和5-FU组的切片大部分呈现坏死细胞的改变：染色质淡染，细胞器肿胀，空泡样变。这两组均未见有大量细胞发生凋亡特征性改变。

2.3琼脂糖凝胶电泳 DNA梯状条带是细胞发生凋亡的特征性改变，四君子汤组和5-FU组电泳带均未见到DNA电泳带呈明显的梯状条带。

3、讨论

实验结果表明，四君子汤组瘤重比空白组显著减小，说明该方对抑制瘤体大小是有积极的作用，临床应用于肿瘤的治疗是有益的。

凋亡细胞形态上初期为细胞核的紧密、细胞浆的压缩，随后细胞核碎裂而演变为凋亡小体，但其他细胞器仍保持完整。生化特征上最显著的表现是，核小体间的DNA双键裂解，形成180～200bp的片段，在DNA琼脂糖凝胶电泳时呈“梯形”[2]。我们在实验中通过电镜下观察和琼脂糖凝胶电泳的检测，四君子汤组未出现明显的凋亡特征标志，琼脂糖电泳亦未出现典型的DNA“梯形条带”，没有见到典型的凋亡改变。此研究表明，四君子汤在荷瘤小鼠体内表现出明显的抑瘤率，其机制与诱导肿瘤细胞凋亡无关。

四君子汤以补益为主，可能无直接攻邪的作用。体内实验中四君子汤组有明显的抑瘤作用，这可能通过整体其他途径起作用。文献报道，补益药在体内实验中对荷瘤动物的免疫功能、生存时间等都有积极的作用[3]。四君子汤可以使荷瘤小鼠NK细胞活性显著升高，四君子汤类补益药的抗肿瘤机理可能主要是提高机体免疫功能，增强体内NK细胞和LAK细胞的活性，发挥间接杀伤作用[3]，通过扶正达到祛邪的目的。

实验结果提示，属于补益的四君子汤可以显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，证明这类中药在体内有明显的抑瘤作用。四君子汤在体内没有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，其对肿瘤的影响可能通过其他作用而达到的。