C肽释放试验需要患者隔夜空腹8-12小时，然后空腹的时候采血，同时化验血糖和C肽。采血之后，可以进食100g的馒头或者是服用75g糖粉，30分钟、60分钟、120分钟和180分钟后分别抽血，抽静脉血的血糖和C肽，依据这个结果来看C肽释放试验。
一般来说，应用胰岛素的患者需要完善C肽释放试验，因为应用胰岛素的患者不能通过测胰岛素的水平来明确胰岛功能，只能通过C肽释放试验来明确胰岛功能。
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