肌肉注射的进针深度一般约为2.5-3cm，大约是针头的2/3，对于特别消瘦或者儿童进针深度可以酌情减少。肌肉注射最常用的部位是臀大肌注射，定位方法是从臀裂顶点向左或向右画一水平线，然后从髂棘最高点向下做一垂直平分线，外上1/4为注射部位。注射时应根据药液量、粘稠度和刺激性的强弱选择合适的注射器、针头以及合适的注射部位，防止损伤神经和血管。药物抽取后应立即注射，以防效价降低。进针后应先抽有无回血，无回血后方可注入药液。
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