维生素B12注射液是抗贫血药，维生素B12参与体内甲基转换及叶酸代谢，促进5-甲基四氢叶酸转变为四氢叶酸。维生素B12缺乏时会导致DNA合成障碍，影响红细胞的成熟。
维生素B12还促使甲基丙二酸转变为琥珀酸，参与三羧酸循环，此作用关系到神经髓鞘脂类的合成及维持有髓神经纤维功能完整，维生素B12缺乏症的神经损害可能与此有关。因此维生素B12注射液主要用于因内因子缺乏所致的巨幼红细胞性贫血，也可以用于亚急性联合变性神经系统病变，如神经炎的辅助治疗。
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