24小时尿游离皮质醇测定的方法是收集24小时的尿液，具体的测定方法有化学发光免疫测定法和竞争性蛋白综合分析法。皮质醇主要是由肾上腺皮质束状带及网状带细胞所分泌，皮质醇进入血液后90%的皮质醇与结合蛋白及清蛋白结合，游离状态的皮质醇极少，血液中5-10%的游离皮质醇从尿液中排出。
由于皮质醇分泌有昼夜节律变化，一般检测上午8时和午夜2时的血清皮质醇浓度，表示其峰浓度和谷浓度。24小时尿游离皮质醇则不受昼夜节律影响，更能反映肾上腺皮质分泌功能。因此，常以血清皮质醇和24小时游离皮质醇作为筛查肾上腺皮质功能异常的首选指标。皮质醇测定的适应症包括诊断皮质醇增多症或皮质醇缺乏，作为许多功能试验的一部分，鉴定皮质醇增多和皮质醇不足。
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