营养物质、神经体液、药物刺激分泌胰岛素，血中葡萄糖水平是调节胰岛素分泌最重要的因素，而身体当中氨基酸刺激胰岛素分泌，其中精氨酸、赖氨酸刺激作用最强，血中游离脂肪酸和酮体明显增多时也可以促进胰岛素的分泌。长时间高血糖、高氨基酸、高血脂可以持续刺激胰岛素分泌，导致胰岛β细胞功能衰竭，胰岛素分泌不足而引起糖尿病。
多种激素刺激胰岛素的分泌，胃肠激素、胰高血糖素、生长激素、皮质醇、甲状腺激素都可以通过直接或间接的血糖升高，刺激胰岛素的分泌，迷走神经、交感神经兴奋也可以刺激胰岛素的分泌，使用的某些降糖药物，像磺脲类、非磺脲类的药物也促进胰岛素分泌，新型的降糖药，GLP-1受体激动剂也可以促进胰岛素的分泌。
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