研究加味黄芪赤风汤对脂多糖(LPS)刺激的肾小球系膜细胞(GMC)增殖,细胞上清液中层粘连蛋白(LN)、IV胶原纤维(Col-IV)、纤维连接蛋白(FN)的表达以及对细胞周期的影响,探讨其在治疗IgA肾病、防治肾脏纤维化中的意义。
加味黄芪赤风汤及替米沙坦大鼠灌胃后,制备含药血清,用含10 %含药血清的DMEM培养液体外培养GMC,LPS作为刺激因子,将细胞分为空白组、LPS组、替米沙坦组、加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组;①采用CCK-8法、MTT法检测含药血清对GMC的毒性作用,并动态观察在各种处理因素的作用下,GMC的增殖情况。②采用酶联免疫法吸附试验(ELISA)测定体外培养的GMC在各种处理因素的作用下,细胞外基质(ECM)即:LN、Col-IV、FN的分泌情况。③流式细胞仪检测细胞周期。
与正常组相比,各含药血清对GMC无毒性作用(P0.05);LPS能刺激体外培养的GMC增殖,0.625-80ug/ml LPS组与正常组相比,细胞增殖有统计学意义(P0.05 span=);加味黄芪赤风汤组在24、48、72小时对LPS刺激的GMC增殖都有抑制作用,且24小时各组抑制率最高;在某个固定的时间点中药各组抑制率相比,中倍组与高倍组无统计学差异,中倍组与低倍组相比有统计学差异(P0.05 span=);高、中剂量加味黄芪赤风汤可阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞百分比增多,S期细胞百分比减少,且其差异与模型组相比具有统计学意义(P0.05 span=);在对ECM的影响中,72小时时较模型组相比,加味黄芪赤风汤高剂量组中Col-Ⅳ、FN的含量明显减少(P0.01 span=),而LN含量变化不明显;中剂量组中Col-Ⅳ、FN、LN的含量均明显减少(P0.01 span=);低剂量组仅有FN含量减少(P0.01 span=),而Col-Ⅳ、LN含量变化不明显。
LPS能促进GMC增殖;加味黄芪赤风汤能显着抑制LPS刺激下GMC的增殖,使系膜细胞阻滞于G0/G1期,且可以减少ECM的分泌,说明GMC是加味黄芪赤风汤发挥治疗作用、预防肾脏纤维化作用的重要靶细胞;加味黄芪赤风汤以一定的剂量及时间依赖关系抑制GMC的增殖,说明我们临床用药时间和用药剂量是合理的,并且长期服药是安全有效的。