糖原累积病II型如何进行诊断

GSD Ⅱ型是一种进行性致死性的代谢性肌病，肌肉组织、皮肤成纤维细胞、外周血淋巴细胞亦可准确检测GAA活性，但均具一定局限性，肌肉活检为有创性检测，不易为患者接受；皮肤成纤维细胞测定GAA活性被认为是GSDⅡ型酶学诊断的金标准[8]，但从皮肤活检、细胞培养到酶活性测定至少需要数周时间；淋巴细胞分离纯度不高将导致检测的假阴性。采用阿卡波糖抑制剂下的DBS和白细胞法测定GAA活性，具有无创、准确和快速的特点，对早期确诊GSDⅡ型患者具有重要意义。

本研究所建立的DBS法测定GAA活性，批内变异在8％以内，批间变异在10％以内，可见该法具有较好的精密度。干血滤纸片存放在室温或低于室温环境4周对GAA活性无明显影响，37℃存放2周内GAA活性也基本稳定。DBS法采血和保存运输方便，对外地疑诊患者送检GAA测定提供了极大的便利性和可行性。而且从方法的精密度、标本保存条件以及其高通量检测的特点，DBS法可较好地满足新生儿疾病筛查的要求。GSDⅡ型发病率随人群和地理分布的不同有很大差异 [1,3]。由于该病临床表现不特异以及国内临床医生对其认识程度有限，迄今中国大陆对GSD Ⅱ的报道迄今仅有31例[10-14]，中国大陆地区的GSD Ⅱ发病率等流行病学资料尚待开展新生儿疾病筛查后进一步明确。

本研究所建立了DBS法的正常新生儿组和儿童-成年组GAA活性的中位数分别为27.09和16.36pmol/（punch?h），新生儿组明显高于儿童-成年组。Meikle等[14]采用免疫定量法检测的澳大利牙和丹麦正常新生儿组的中位数为46.8 和45.7pmol/（punch?h），而澳大利亚成年组中位数为24.4pmol/（punch?h），Zhang等[7]报道正常成人DBS法GAA中位数为20 pmol/（punch?h），与我们的研究结果类似。由于上述研究中所涉及GSD Ⅱ型患者GAA酶活性均低于明显低于检测限，故新生儿组和儿童-成年组的正常值的差异并不影响患者的诊断与筛出。

本研究对临床疑诊的4例GSDⅡ型患者进行GAA活性测定明确了诊断。DBS法发现患者GAA酶活性均低于检测限，提示DBS法能准确区分患者和杂合子。6例杂合子酶活性与正常对照低值区有交叉，故DBS法无法区分杂合子和正常人。白细胞法测定3例患者的GAA活性，发现患者较正常人显著降低。结合进行性肌无力的临床症状和心肌肥厚、肌活检病理的检查结果，患儿2诊断为GSDⅡ型婴儿型，患者3、4诊断为GSDⅡ型迟发型。

综上所述， DBS法测定GAA活性具有敏感、快速、高通量、样本便于运输和保存等优点，适用于GSDⅡ型的新生儿和高危人群筛查和诊断；白细胞法测定GAA活性具有准确、快速、特异性高等优点，适用于可疑患者的确诊。